2008年9月10日 星期三

實驗室的訓練~part2

這篇想跟大家繼續聊聊實驗的東西

上一篇寫到了實驗室裡的各種水的介紹

所以這次就來談談我們在實驗時也會用到相當多的buffer

首先講一下最常用到的酒精

一般來說現在要買百分之百純乙醇是不可能的

因為已經被列入管制藥劑了

除非是在帳款項目上動手腳來個掛羊頭賣狗肉

送乙醇來然後上面標甲醇XD

當然這大家平常自己知道就好了~呵呵

所以我們現在訂的大概都是95% or 70%酒精

95% up 通常都只用在酒精沈澱法~以後再詳述

其他在擦拭,消毒或做culture時用的都是70~75%

如果買來時剛好就是我們要的濃度當然就很好

但如果是要由較高濃度往低濃度稀釋呢?

這時候要記住一個觀念~水永遠是最後加!!!!

舉個例子~假設我們現在有100% alcohol 要稀釋成70% 的話(配製一升)

就必須要先倒700ml alcohol 然後補dd water至一升

原因是加進去混合後體積會改變

所以如果你加水然後再補酒精的話你的比例就是錯的了

這個觀念相當重要

可以套用到接下來講的東西

平常大家在配buffer時一定會有碰到用鹽的buffer

像是常用的PBS 和TBS(這個在之後的culture篇會詳細介紹)

我們這種都是把溶質秤好後就先加入瓶子或燒杯裡

然後補水補到我們要的體積

這邊再記一個觀念~溶質或我們要稀釋的東西要量得很準,水則是加差不多就好

平常實驗室裡配buffer都會喜歡一次就配較高的濃度

比如說10X or 5X

原因是每種buffer都有要求一定的PH值才能有最佳的作用條件

而有調過PH值的就知道很麻煩

要用酸鹼滴定去調~NaOH and HCl

所以如果你每次buffer用完就要調一次ph值的話一定會煩死,說不定會先累死(笑)

而你如果先配好高濃度的然後調好ph值

你以後就只要把高倍的拿出來稀釋就好了

像10X 到1X的話

就是取1的量補到10

不要小看這個看似簡單的東西

我看過很多人到現在連換算都還算不好

在這邊特別再教各位幾個簡單又好用的方法

如果老師給你5x 的buffer要你稀釋成1X

然後配500 ml的話,請問你buffer加多少而水又加多少?

另一個問題~瓶子裡剩下10X的 35 ml

請問可以配成1X的多少量呢

解答:

第一個問題是知道要配的量了~這種就是要用除法

把要的體積除以倍數就會得到需要50 ml stock然後補水到500 ml

第二個問題是知道剩多少的量然後求還能配多少

這種就改用乘法變成35*10=350 ml

不要以為這種東西你都已經會了

當你在做實驗的時候

這種東西都要練到變反射了

要不然你做實驗做到一半你還要在那邊算個老半天

這也是為什麼同樣的實驗~有些人要做半小時而有些人就要一小時

除此之外這種東西都是實驗的基本功

先打好基礎以後在配藥時或配buffer時才不會配錯東西或搞錯濃度

希望大家能參考上述經驗囉

祝各位能體會到實驗的樂趣

by 終於完成第二篇實驗相關文章的vanness

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